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Abstract: . . . LS 1701 (ISH) Beckman Thermomixer Thermomixer comfort Eppendorf Tischzentrifuge Centrifuge 5415 C Eppendorf Ultrazentrifuge Superspeed RC-2B Sorval UV-Transilluminator Bio Doc Analyse System Biometra Vakuumrotationsverdampfer Univapo 150 H Uniequip Vortexgert VF 2 IKA-Labortechnik Wasserbad GFL Wasserbad (ISH) GFL Zentrifuge Megafuge 1.OR Heraeus . . . . . . GFL Wasserbad (ISH) GFL Zentrifuge Megafuge 1.OR Heraeus Zentrifuge Biofuge 13R (ISH) Heraeus Page 32 46 Verbrauchsartikel Bezeichnung/Besonderheiten Bezug 0,2 ml Reaktionsgefe Biozym 0,5 ml Reaktionsgefe RNAse-frei Eppendorf 0,5 ml Reaktionsgefe Safe-Lock 1,5 ml Reaktionsgefe RNAse-frei Eppendorf 1,5 ml Reaktionsgefe . . . . . . vollstndigen Denaturierung. Die entstandenen Proteinkomplexe wandern somit im elektrischen Feld zur Anode und ihre elektrophoretische Beweglichkeit ist ausschlielich durch die Gre des Molekls und die Porengre der dreidimensionalen Gelmatrix bedingt. Fr den Nachweis von Kollagen Typ I wurden in dieser Arbeit 5 g Protein je Spur in Elektrophoresepuffer (50 mM Tris, 400 mM Glycin, 0,1% SDS (w/v)) fr 60 min bei 20 mA in einem 7,5%igen Polyacrylamidgel aufgetrennt. Auf . . . . . . -Lactamase-Gen, das den Bakterien eine Ampicillinresistenz verleiht, wodurch die Selektion plasmidtragender Bakterienklone ermglicht wird, ein lacZ-Gen, zur farblichen Unterscheidung von selbstligierten und fragmenttragenden Plasmiden, sowie einen T7- und einen Sp6-Promoter fr die Produktion von Sense- und Antisense-RNA-Transkripten. Page 16 30 2.2.9.1.3 TA-Ligation Der Einbau des PCR-Produktes in den Vektor wird durch die T4-DNA-Ligase . . . . . . GFL Wasserbad (ISH) GFL Zentrifuge Megafuge 1.OR Heraeus Zentrifuge Biofuge 13R (ISH) Heraeus Page 32 46 Verbrauchsartikel Bezeichnung/Besonderheiten Bezug 0,2 ml Reaktionsgefe Biozym 0,5 ml Reaktionsgefe RNAse-frei Eppendorf 0,5 ml Reaktionsgefe Safe-Lock 1,5 ml Reaktionsgefe RNAse-frei Eppendorf 1,5 ml Reaktionsgefe . . . . . . Page 9 23 Bei einem semiquantitativen Vergleich zweier PCRs ist es von essentieller Bedeutung, dass sich die PCR im linear ansteigenden Teil der DNA-Amplifikationskurve befindet, um grtmgliche Unterschiede in der Genexpression zu zeigen. Es wurden deshalb PCRs mit identischen Reaktionsanstzen, gleichen Versuchsbedingungen, aber unterschiedlichen Zyklenzahlen durchgefhrt. Die Proben wurden nebeneinander in einem 2%igem Agarosegel aufgetragen (siehe . . . --3000,6,250,3435,63715
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