Abstract: . . .  Immunfloureszenz 67 4.9.3.1 Nachweis von P2Y1 67 4.9.3.2 Nachweis von P2X1 69 4.9.4 Analyse mittels Durchfluzytometrie 69 4.9.5 Stabile Expression Etablierung von Stabilen Zellinien 71 4.10 Pharmakologie der stabil exprimierten Rezeptoren P2Y1 und P2X1 in Astrozytoma 1321N1 Zellen 74 4.10.1 Native, nicht transfezierte Astrozytoma 1321N1 Zelllinie 74 4.10.2 Astrozytoma 1321N1 Zelllinie mit stabil exprimierenden . . .
. . .  inkubiert und mit ca. 900 rpm gerhrt. 3.4 Intrazellulre Kalziummessungen 3.4.1 Prperation von gewaschenen Thrombozyten Die Bestimmung der intrazellulren Kalzium-Konzentrationsnderungen in Thrombozyten erfolgt nach der von Sage et al. (1990) (125) und Geiger et al. (1 . . .
. . .  Phosphorylierungsstatus des Proteins VASP untersucht werden, da dies eine entscheidende Rolle bei der Hemmung der Aktivierung der Thrombozyten spielen knnte. Im zweiten Teil der Arbeit wurden die zum damaligen Zeitpunkt bereits molekular beschriebenen ADP-Rezeptoren P2Y1 und P2X1 untersucht. Ziel war eine Klonierung dieser Rezeptoren aus Thrombozyten und Herstellung von Zelllinien, die diese Rezeptoren exprimieren, um eine bessere pharmakologische und biochemische Charakterisierung zu ermglichen. . . .
. . .  thrombozytenarme Plasmaprobe ( platelet-poor plasma , PPP) durch 2-mintige Zentrifugation bei 5000g aus dem PRP des jeweiligen Probanden gewonnen. Das Aggregometer wird mit diesem PPP, das dem Ergebnis einer maximalen Aggregation entspricht, auf 100% Transmission geeicht. Demgegenber streut PRP Licht entsprechend einer relativen Transmission Page 32 22 von 0%. Whrend der Messung wird das PRP durch einen Rhrmagneten in der Kvette  . . .
. . .  VASP-Ser239 Maus, IgG1 nanoTools 1:100 P5D4 VSV Glykoprotein G Maus, IgG1 Sigma 1:5000 (IF) 1:10000 (WB) Anti-HA (clone 12CA5) Hmagglutinin - Protein des humanen Influenza- Virus Maus, IgG2b Roche Diagnostics 1:500 (WB) 1:1000 (IF) Anti-FLAG M2 FLAG-Peptid Maus, IgG1 Stratagene 1:500 (WB) 1:1000 (IF) Anti-c-myc  . . .
. . .  in silikonierten Rhrchen inkubiert und mit ca. 900 rpm gerhrt. 3.4 Intrazellulre Kalziummessungen 3.4.1 Prperation von gewaschenen Thrombozyten Die Bestimmung der intrazellulren Kalzium-Konzentrationsnderungen in Thrombozyten erfolgt nach der von Sage et al. (1990) (125) und Geiger et al. (1 . . .
--3000,6,250,3106,63989